回答1、准备工具：准备镊子、EP管、枪头等工具，然后用高压灭菌锅进行杀菌。2、消毒处理：用酒精对手掌、镊子进行消毒，然后取出10支EP管放入试剂盒内。3、放入菌种：用移液枪取出甘油，放入EP管，然后再将菌种放入管内。4、低温保存：盖好盖子，做好标注，将所有菌种都装到袋中，再将袋子置于冰箱内保存。

一、甘油保藏菌种实验步骤

1、准备工具

准备好镊子、EP管、枪头等工具，然后将其放入高压灭菌锅内做杀菌处理。

2、消毒处理

将酒精擦拭在手上进行消毒，并对镊子做消毒处理，再用镊子取出10支EP管并放入试剂盒中。

3、放入菌种

用移液枪取出50%的甘油，然后放入EP管中，再取出菌种放入EP管。

4、低温保存

盖上盖子，并做好标注，然后将所有菌种都装到袋子中（袋子也要做好标注），再将袋子放在-20℃的冰箱内保存。

二、甘油保藏菌种原理

1、保藏原理

甘油可以作为菌种的保护剂，低温冷冻的条件下，使微生物的新陈代谢趋于停止，从而达到长期有效的保藏目的（保藏温度越低，效果越好）。

2、注意事项

（1）应使用非选择性的增菌培养基，因为微生物在选择性培养基中生长时可能会丢失某些生物特性，而且保藏的菌种的生物特性可能和标准菌株的特性有所差异。

（2）菌液的浓度越大，菌种的保存时间一般越长。保藏细菌常使用菌液，保藏霉菌常使用无菌水，或用生理盐水制备成的孢子悬液。

（3）甘油的最终浓度为10-20%。甘油原液过于粘稠，需配制适宜的甘油水溶液，将菌悬液和甘油按照1：1的体积比例充分混匀，再分装至经过灭菌处理的保藏管中，放入-80℃（-70℃）的冰箱内保存。

（4）该方法适合中长期菌种保藏，保藏时间通常是2-4年左右。